基（jī）因擴（kuò）增實驗又稱PCR實驗，其（qí）特點是（shì）能（néng）將微量的DNA大幅增加，PCR分（fèn）子生物（wù）學研究和（hé）實驗的常規（guī）方法，廣泛應用於生物學各（gè）個領域，例如：檢驗艾滋病、乙型肝（gān）炎、禽疫病、癌基因的檢測（cè）和診斷，DNA指紋、個體識別、親子鑒別及法（fǎ）醫物證（zhèng），動（dòng）、植物檢疫，動物及其衍生產品檢測，動物飼料（liào）、化妝品、食品衛生檢測，轉基因作物與轉（zhuǎn）基因微生（shēng）物檢測等。

一、PCR實驗室平麵布局

基（jī）因擴增實驗（yàn）室（shì）又稱（chēng）PCR實驗（yàn），實驗室原則（zé）上分為4個（gè）單獨的工作（zuò）區域，前兩區為擴增前（qián）區，後兩區為擴增後區。擴增前區與（yǔ）擴（kuò）增後（hòu）區應嚴格分開。實驗材（cái）料、試劑、記錄紙、筆、清潔材（cái）料等，隻能（néng）從（cóng）擴增前區流向擴增後區，即從試（shì）劑準備（bèi）區→樣（yàng）品製備區（qū）→擴（kuò）增區→擴（kuò）增產物分析區，不得（dé）逆向流動。實（shí）驗室的（de）氣流也（yě）應從擴增前（qián）區流向（xiàng）擴增（zēng）後區，不得逆（nì）向流動。各工作區域（yù）應（yīng）設置緩衝間，工作間與緩衝間之（zhī）間宜安裝連（lián）鎖（suǒ）裝置。不同功（gōng）能的核酸檢驗工作區應是（shì）分隔獨立（lì）的工作（zuò）室，並有明顯的標誌：各（gè）區間不能直通。各區之間如果是緊（jǐn）密（mì）相連，需安裝（zhuāng）物品傳遞窗。每（měi）個工作區域（yù）的頂部應安裝紫（zǐ）外（wài）燈，紫外燈的波（bō）長為254nm;安裝數量（liàng）為每20㎡安（ān）裝一支40W的紫外（wài）燈。

實驗室較（jiào）為理想的布局模式為有一個專用走廓，試劑準備區、樣（yàng）品（pǐn）製（zhì）備區、擴增區和產物分析區很規範地排列在一起，前三個區各（gè）有一個緩衝間，可（kě）供換（huàn）工作服和工作鞋使用，頂上（shàng）可裝一紫外燈。內實驗區域（yù）設為正壓或常壓狀態，緩衝間內（nèi）設為負壓狀（zhuàng）態（tài）(可（kě）上設（shè）一抽（chōu）風（fēng）裝置)，使這三（sān）個區的空（kōng）氣（qì）流向為由實驗區域（yù）內向外，緩衝間內通向內實（shí）驗室（shì）和走（zǒu）廊的門可安裝一種連鎖裝置，當一個門打（dǎ）開時（shí），另一門處於關閉狀態（tài），防止出現兩（liǎng）個門同時打開的情況。產物分析區可不設緩衝間（jiān），但應設為負（fù）壓狀態(裝一（yī）個排風扇即可（kě）)，使空氣流向由外向內，以防止擴增產物的隨（suí）空（kōng）氣流出。每（měi）一區（qū）域都須有明確的標記，工作按試劑準備（bèi）區（qū）、樣品（pǐn）製備區、擴（kuò）增（zēng）區至產物分析（xī）區單一 流（liú）向進行，各區的儀器設備包（bāo）括工（gōng）作服、鞋、實驗記錄本和（hé）筆等都專用。如果無法做到以（yǐ）上模式，以下基本要求做到：

(1)四個（gè）區域（yù）是相互獨立的（de）。

(2)各區（qū）的儀器設備及各種物品是專用的。

(3)各區（qū）完全（quán）獨立，緩（huǎn）衝間（jiān）可有可無（wú）。如為一（yī）個區套一個區的模式，區間不能（néng）直通，應（yīng）有緩衝（chōng）間，供（gòng）換（huàn）工（gōng）作（zuò）服及鞋子用，並保 證兩（liǎng）個區域間始（shǐ）終（zhōng）處（chù）於（yú）完全的分隔（gé）狀態。

(4)產物分析（xī）區（qū）應安裝（zhuāng）排風扇或其他抽風裝置（zhì），維持負壓。

二、各（gè）區功能及主要設備

(1)試（shì）劑準備區（qū）：擴增試劑（jì）的配製（zhì）、分裝和保存（cún）。未（wèi）設緩衝間的試（shì）劑儲存和準備區，工作區域為正壓。用於（yú）擴（kuò）增的試（shì）劑（jì）應冰凍儲存。主要設備有天平、冰箱（xiāng）、離心（xīn）機（jī）、加樣器、振蕩器、紫外燈。

(2)樣（yàng）品（pǐn）製備區：實（shí）驗室（shì）樣（yàng）品（pǐn）的混樣和（hé）測試（shì）樣品的（de）製備。未設緩衝間時工作區域為負壓或減壓，可安裝排風係統。所用的器具在使用前應經（jīng）過清洗並消毒，防止交叉汙染。主要（yào）設備有（yǒu）冰箱、生物安 全櫃（guì）(或潔淨工作台、排（pái）風櫃)、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下（xià）水（shuǐ）設備、廢棄（qì）物容器、紫（zǐ）外燈（dēng）。根據製備樣（yàng）品的性質（zhì）和要求（qiú）決定操作台是選用生物安（ān） 全櫃（guì）、潔淨（jìng）工（gōng）作台還是（shì）排毒櫃，如疾控中（zhōng） 心、臨床醫學實驗（yàn）室一般選用生物安 全櫃，植物轉基因、檢疫等可（kě）選用排毒櫃，樣品製備需要較高潔淨條（tiáo）件（jiàn）的選用（yòng）潔（jié）淨工作台。

(3)擴（kuò）增區：PCR擴增（zēng）反應體係的配製和（hé）模板的（de）加（jiā）入（rù），核酸擴增。未設緩（huǎn）衝間的擴增區，工作區域為負（fù）壓或減壓，可安裝排風係統。加樣應在超淨（jìng）工作台(生（shēng）物安 全櫃)內進行，超淨工作台的氣流方向宜選擇垂流（liú）式。核酸擴增設備、冰箱、潔淨工作台（tái）(生（shēng）物（wù）安（ān） 全櫃)、離心（xīn）機、加樣器、廢棄物容（róng）器、紫外燈。

(4)擴（kuò）增（zēng）產物（wù）分析區：擴增產物的測定。未設緩衝間的擴增產物區（qū），工作（zuò）區域為負壓或減壓，應安（ān）裝排（pái）風係統（tǒng）。若實驗（yàn）僅采用全自動擴增檢測儀（yí）(如（rú）實時熒光定量（liàng）PCR儀（yí）)，可（kě）將擴（kuò）增區與（yǔ）擴增產物分析（xī）區合並為一個區。本（běn）區所（suǒ）使用的儀（yí）器設備（bèi）有酶（méi）標儀（yí）、洗（xǐ）板機、加樣器（qì）和水浴（yù）箱等。

三、實驗（yàn）室空調通風係統設計及壓（yā）力控製（zhì）

各個區域之間應具備（bèi）單向的實驗（yàn）工藝流、物（wù）流（liú）、人流（liú）與氣流（liú），形成單向流程的保護屏障，避免實驗（yàn）之間的相互幹擾，防止核酸（suān）氣溶膠對實驗過（guò）程造成汙染產生假（jiǎ）性結果。

PCR實驗室並沒有（yǒu）嚴格（gé）的淨化要求，但是為避免各個實驗（yàn）區域間交叉汙染的可能性，宜采用（yòng）全送全排的（de）氣流組織形式。同時，要嚴格控製送、排風的比（bǐ）例以保證各（gè）實驗區的壓力要求（qiú）。

四、實（shí）驗室裝修

實驗室的牆體，包括頂棚，應結構（gòu）牢固、氣密性（xìng）好;所有（yǒu）陰角宜（yí）采用圓弧形線（xiàn）條過（guò）渡;牆體內壁光（guāng）潔、不（bú）吸附、耐腐蝕、易清洗消（xiāo）毒（dú）;地麵材料應滿足無縫隙、無滲（shèn）漏、光潔、耐腐蝕（shí）的要求（qiú）。地麵建議使（shǐ）用PVC卷材地麵或自流坪地麵，整體性好，便於（yú）進行（háng）清掃，耐腐蝕（shí）。沒有條（tiáo）件的也可采用水（shuǐ）磨石地麵（miàn），或（huò）大（dà）塊的瓷（cí）磚(≥800mm)接縫需（xū）要小於2mm。燈具要選用淨化燈具，能達（dá）到便於清洗（xǐ）、不積塵的特點。

在三個（gè）實驗（yàn）區和三個緩衝區頂部以（yǐ）及傳送窗內部（bù）安裝有紫外燈，供消（xiāo）毒用。在試（shì）劑準（zhǔn）備區和樣品製（zhì）備（bèi）區還（hái）設置（zhì）移動紫外（wài）線燈，對實驗桌進行（háng）局（jú）部消毒。

試劑（jì）和標本通過機械連鎖不鏽鋼傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中（zhōng）不受汙染。

試劑和樣（yàng）品通過機械連鎖不鏽鋼(不建議（yì）使用電子連鎖方式)傳遞（dì）窗傳遞，保（bǎo）證試劑和（hé）樣品在傳遞過程中不受汙染(人物分流)。

五、注（zhù）意問題

(1)幾（jǐ）個區域的大小設置情況，應（yīng）該（gāi）是試劑（jì）準備區、產（chǎn）物擴（kuò）增區、擴（kuò）增（zēng）分析區，要小一些（xiē）。樣（yàng）品製備區應大一些（xiē），因為樣品製備（bèi）室要（yào）放（fàng）置一個生物安 全櫃（guì）和一個低溫冰箱。

(2)試劑準備區、樣品製備（bèi）區設立緊急洗眼（yǎn）器，以備不時之（zhī）需。

(3)PCR實驗室（shì）的潔淨度可以根據用戶的實際（jì）使用情況（kuàng）和資金的（de）投入來設計。